Prestations de conseil

 

Test de Coombs Direct TCD

Le Test de Coombs Direct (TCD) dénommé également Test Direct à l'Antiglobuline (TDA), permet, grâce à un sérum d'antiglobuline humaine, de révéler la présence d'anticorps fixés sur l'antigène correspondant, à la surface de l'hématie in vivo et susceptible d'entraîner leur destruction (hémolyse).

L'antiglobuline utilisée est essentiellement de deux classes : un anti-IgG ou un anti-Complément. L'antiglobuline Anti-IgG est composée d'immunoglobulines dirigées contre le fragment Fc de l'IgG. Celle-ci peut donc mettre en évidence des anticorps de type IgG fixés sur les globules rouges testés. L'antiglobuline de type anti-complément est essentiellement composée d'anti-C3d. Le C3d est présent en grande quantité et de façon relativement stable à la surface des globules rouges sensibilisés in vivo à la suite de l'activation du complément par certains complexes immuns anticorps-antigène.

Le TCD est essentiellement utilisé lors de la recherche de Maladies Hémolytiques du Nouveau-Né (MHNN), d'une réaction transfusionnelle, d'Anémie Hémolytique Auto-Immune (AHAI) et d'anémie hémolytique d'origine médicamenteuse afin de révéler un conflit immunologique.

La positivité d'un TCD est le témoin de la sensibilisation des hématies in vivo. Pour que la réaction puisse être positive, il faut au minimum 200 molécules d'Ig ou de C3d sur le globule rouge. Mais cela ne correspond pas forcément à une hémolyse ou une anémie chez le patient. Inversement, un TDA négatif ne signifie pas l'absence d'hémolyse à la suite d'un conflit immunologique.

 

TCD positif avec de l'anti-IgG

 

Le TCD avec de l'anti-IgG permet de mettre en évidence une sensibilisation (complexe immun anticorps-antigène) des globules rouges par un anticorps de classe IgG. La mise en évidence de ce complexe immun est très importante lors de la recherche d'une maladie hémolytique du Nouveau-né (MHNN) suite à une incompatibilité foeto-maternelle (IFM), et lors d'un problème suite à une transfusion sanguine de globules rouges.

Dans tous les cas où une sensibilisation avec un anticorps IgG est mise en évidence dans un contexte de conflit immunologique, il faudra déterminer l'anticorps responsable de la sensibilisation des hématies. Pour cela, une élution est réalisée. Celle-ci permet de décrocher les anticorps fixés sur les globules rouges. Puis, une identification des anticorps élués sera réalisée.

 

TCD positif avec de l'anti-C3d

 

Le TCD avec de l'anti-C3d (anti-complément) permet de mettre en évidence une sensibilisation (complexe immun anticorps-antigène) des globules rouges par un anticorps de classe IgM ou IgG ayant activé le complément.

Les anticorps de type IgM ne présentent pas de danger en transfusion sanguine et ne passent pas la barrière du placenta lors des grossesses. Ils présentent donc très peu d'intérêt en transfusion. Son intérêt principal est de confirmer la présence d'un auto-anticorps dans le sérum du patient lorsque celui-ci a été identifié lors de la recherche d'agglutinines irrégulières et lors de maladie hémolytique auto-immune.

 

TCD dit «mixte»

 

Un TCD est dit "mixte" lorsqu'il y a une réaction positive des réactifs anti-IgG et anti-C3d avec les globules rouges du patient. Cette double réactivité met en évidence la présence sur les antigènes des hématies (sensibilisation) d'anticorps de type IgG. Ces IgG ont la capacité d'activer le complément ce qui induit une réaction positive avec l'anti-complément. L'anticorps le plus fréquent qui donne ce type de résultat est l'anti-JK1.

Dans tous les cas où une sensibilisation à un anticorps IgG est mise en évidence, il faudra déterminer l'anticorps responsable de cette immunisation.

 

INTERPRETATION

 

Le TCD est le plus souvent un élément déterminant en faveur du caractère auto-immun d'une anémie hémolytique. Cependant, il ne permet pas à lui seul de porter le diagnostic d'AHAI. En effet, la positivité du TCD peut être liée à d'autres causes que la présence d'auto­ anticorps anti-érythrocytaires :

- des allo-anticorps post-transfusionnels, dirigés contre les hématies transfusées encore présentes dans la circulation,

- des allo-anticorps d'immunisation foeto-maternelle, dirigés contre les hématies de l'enfant,

- des anticorps anti-médicaments à l'origine d'une anémie hémolytique immuno-allergique,

  • des allo-anticorps secondaires à une greffe d'organe ou à une allogreffe de moelle.

 

Le TCD peut être également positif en dehors de toute hémolyse dans certaines situations telles que les dysglobulinémies mono ou polyclonales ou encore les cryoglobulinémies, après administration d'lgG polyvalentes intraveineuses à forte dose, altération de la membrane érythrocytaire, fixation isolée du complément indépendamment de tout anticorps.

Enfin dans 4 % des cas, le TCD peut être négatif et associé à d'authentiques AHAI : il peut être faussement négatif par erreur technique, mauvaise qualité des réactifs, élution des anticorps lors du lavage des hématies, faible densité des anticorps à la surface des hématies.